Anexo:Colorantes vitales
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Anexo:Colorantes vitales. Son aquellos que ejercen su acción en las partes vivas de las células sin alterar su metabolismo, y poniendo de relieve sus estructuras. Son preferidos los colorantes vitales que son retenidos por la célula durante el tiempo necesario para poder realizar la observación.
Sumario
Colorantes vitales básicos
Rojo neutro
Es una sustancia soluble en agua. Puede ser administrada a los animales superiores por vía endovenosa o digestiva, en la proporción del 1%; se aplica diariamente varios centímetros cúbicos de la solución. Por la vía digestiva se usa cuando se trata de estudiar la mucosa digestiva.
En los animales acuáticos (renacuajos, protozoarios, etcétera), se adiciona el colorante al agua donde viven en la proporción de 1 x 100 000 ó 1 x 200 000. El paso del animal colorado al agua natural no provoca la decoloración inmediata, sino que esta tiene lugar después de varios días. Se emplea también como reactivo indicador para conocer la acidez o alcalinidad de las sustancias con que se pone en contacto; pasa del rojo intenso (si tiene pH7 o menos), al rojizo (si tiene pH7,2 a pH7.6); o es anaranjado (sí es superior a pH7.6), hasta ser amarillo cuando tiene pH8, esto es cuando la alcalinidad es débil.
Los cuerpos colorados con el rojo neutro pueden conservarse en esta forma si los colocamos por 12-48 horas en el fijador de Mitamura.
Fórmula:
Solución A
- 10 g de acetato de plomo
- 100 cc de agua destilada
(Debe ser filtrada esta solución.)
Solución B
- 0,5 g de cloruro de sodio
- 9 g de bicloruro de mercurio
- 100 cc de agua destilada.
Preparación: Deben mezclarse 50 cc de cada una de estas soluciones. El precipitado formado se disuelve con la adición de un cc de ácido acético. Los precipitados de plomo que aparecen se eliminan si se pasa rápidamente la preparación por una solución de ácido nítrico al 1%. Los precipitados causados por el bicloruro de mercurio se eliminan mediante una solución de yodo o de Lugol, y luego se le agrega hiposulfito de sodio.
Azul de metileno
Como colorante vital, el azul de metileno se emplea principalmente en las coloraciones postvitales o supravitales, utilizadas para el estudio del tejido nervioso, ya que introduciendo en un animal el azul de metileno en inyección endovenosa, este se fija en las células nerviosas. La solución se prepara en suero fisiológico al 0,5% o al 1%.
Para evitar la decoloración del tejido se coloca la pieza en la solución fijadora de Bethe.
Fórmula:
- 16 g de molibdato amónico
- 100 cc de agua destilada
- 10 gotas de ácido clorhídrico.
La fijación se hace en 4-24 horas, y el lavado será con alcohol. Con este fijador se consiguen preparaciones permanentes.
Verde Jano
Es también un colorante supravital, utilizado para el estudio de mitocondrios. Se aplica por inmersión o inyección. Los mejores resultados se obtienen con sangre. En este caso se usa en una solución al 1 x 10 000 en suero fisiológico al 0,85%. Se aplica una gota en el portaobjeto con sangre fresca, y después, se coloca un cubreobjeto. Una observación minuciosa mostrará mitocondrios primero en los linfocitos y luego en los leucocitos granulares, hasta que todos quedan teñidos.
La coloración dura varias horas, y la corporación puede evitarse poniendo vaselina en el borde del cubreobjeto.
Azul Jano
Es otro colorante supravital, que tiene iguales usos y se aplica de idéntica forma que el verde Jano.
Azul naftol
Ha sido ocasionalmente usado como colorante vital.
Violeta neutral
Tiene propiedades similares al rojo neutro, pero ha tenido menos uso en trabajos microscópicos.
Colorantes vitales ácidos
Alizarina roja S
Se ha usado como colorante vital para el tejido nervioso en pequeños invertebrados.
Púrpura brillante R
Usado como colorante vital para la levadura.
Azul trypan
Se emplea disuelto en agua destilada, al 1% o mejor en suero fisiológico. Se aplica en inyecciones intraperitoneales o subcutáneas, en la proporción de 0,5-1 cc de solución por cada 20 gramos de peso del animal. Las inyecciones se repiten cada 5 días, hasta que el animal tome color azul. La fijación se hace en formol al 10%, y los cortes se realizan por congelación.
Fuente
- De la Torre y Callejas, Salvador Luis. Manual básico de microtecnia biológica. Edición Revolucionaria. Instituto Cubano del Libro. La Habana, 1975. pp. 140-143.
