Microinyección pronuclear
| ||||||
La Microinyección pronuclear o microinyección de DNA en cigotos, es la inyección del gen de interés en un huevo fertilizado. El gen debe ser insertado antes que se efectúe la primera división celular para que todas las células del animal contengan dicho gen. Es una de las técnicas más extendidas en la generación de ratones transgénicos. Sin embargo, esta técnica tiene un éxito limitado en mamíferos superiores, debido a problemas específicos inherentes y a su baja eficacia. Así, para producir un único animal fundador, son necesarios cerca de 1000 cigotos.
La microinyección de genes dentro de óvulos fertilizados es un vector comúnmente utilizado en la producción de plantas y animales trasngénicos.
Para ejecutar la microinyección se necesita personal capacitado con el objetivo de evitar daños a la estructura genética.
Metodología para su implementación
Se realiza mediante la utilización de una micropipeta de vidrio (0,1 micras de diámetro) para poder inyectar el ADN de interés en el pronúcleo de un óvulo fecundado.
Esta metodología requiere un equipo de ópticas y brazos mecánicos móviles (micromanipulador). La microinyección de ADN fue la primera técnica exitosa para lograr un mamífero transgénico y fue aplicada en ratones por Gordon y Ruddle (1981), luego se utilizó en otras especies como ratas, conejos, ovejas, cerdos, aves y peces. Sin embargo, aún es difícil controlar el lugar donde se integrará el transgen en el cromosoma, y esto a veces es causa de variación en el nivel de su expresión.
La microinyección de pronúcleos es técnicamente exigente y tiene una baja tasa de éxito, sobre todo en especies donde la visualización de los pronúcleos es compleja. Por ejemplo, estudios de transferencia de genes revelan que en bovinos fue necesario inyectar 36500 cigotos para generar 18 terneros transgénicos (Eyestone 1999). La inserción de ADN es un proceso aleatorio y existe una alta probabilidad de que el transgen introducido no se inserte en el sitio adecuado para su expresión.
A su vez su presencia puede ser baja en las células de la línea germinal de la que surgen los gametos. A pesar de estas limitaciones, la microinyección pronuclear todavía es utilizada por los laboratorios de transgénesis, debido a su abilidad en producir descendencia transgénica y a la facilidad de su aplicación respecto a otros métodos.
Ineficiencias
Es un método ineficiente para generar animales transgénicos debido a que conlleva la integración aleatoria del gen foráneo en el genoma receptor con las siguientes consecuencias:
El gen exógeno puede insertarse en un lugar erróneo, por ejemplo en medio de un gen del genoma receptor, interrumpiéndolo y causando su mutación y, con ello, la muerte del embrión o alteraciones en el animal transgénico nacido.
Fuentes
- academia.edu Consultado el 22 de octubre de 2019.
- bmbq.uma.es Consultado el 22 de octubre de 2019.
- researchgate.net Consultado el 22 de octubre de 2019.
