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| − | El '''bromuro de etidio''' (BrEt) es un colorante fluorescente que se usa en técnicas de biología molecular como la electroforesis en gel de agarosa de productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) hace muchos años, con medidas fluorimétricas sensibles debido al rango dinámico de fluorocromos disponibles, este químico emite una luz anaranjada cuando es expuesto a luz ultravioleta, que se intensifica después de haberse unido a una cadena de ADN. Conocido también con los siguientes nombres: Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-6-fenilfenantridinio, Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-9-fenilfenantridinio, Bromuro de 3,8-diamino-1-etil-6-fenilfenantridinio, Bromuro de Homidio, EtBr. | + | El '''bromuro de etidio''' (BrEt) es un colorante fluorescente que se usa en técnicas de [[biología molecular]] como la [[electroforesis]] en gel de [[agarosa]] de productos de la reacción en cadena de la polimerasa ([[PCR]]) hace muchos años, con medidas fluorimétricas sensibles debido al rango dinámico de fluorocromos disponibles, este químico emite una luz anaranjada cuando es expuesto a [[luz ultravioleta]], que se intensifica después de haberse unido a una cadena de [[ADN]]. Conocido también con los siguientes nombres: Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-6-fenilfenantridinio, Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-9-fenilfenantridinio, Bromuro de 3,8-diamino-1-etil-6-fenilfenantridinio, Bromuro de Homidio, EtBr. |
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| + | La secuencia primaria del ADN tiene relativamente poco efecto en la unión de [[ácidos nucleicos]], lo que hace de este colorante una buena tinción de uso general. El colorante penetra en geles electroforéticos de forma rápida y eficiente. El bromuro de etidio puede prefabricarse en geles, usarse como tinción posterior y también se usa ocasionalmente como prestina de [[ARN]] en la electroforesis en gel de [[formaldehído]]-[[agarosa]]. | ||
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| + | El [[gel de agarosa]] es una buena forma de separar el ADN según su tamaño, pero debe haber una forma de visualizarlo. Normalmente, se utiliza un colorante intercalante para este fin. Una elección muy común de colorante es el bromuro de etidio. El bromuro de etidio es una sal, por lo que se separará en solución para producir el [[ion]] etidio con carga positiva más un ion bromuro. El ion etidio planar puede insertarse (intercalarse) entre las bases apiladas del dsADN helicoidal, interactuando con ellas mediante [[fuerzas de Van der Waals]]. También se producen interacciones entre un [[catión]] etidio y los [[fosfato]]s con carga negativa del ADN. | ||
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| + | Si bien el etidio presenta una fluorescencia naranja cuando se expone a la luz ultravioleta , lo hace con mucha más intensidad cuando se intercala con dsADN. Después de interactuar y concentrarse en el gel en las ubicaciones de las cadenas de ADN , el etidio se puede visualizar a través de la exposición del gel a la luz ultravioleta , generada a través de una caja de luz ultravioleta. | ||
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| + | También es un potente mutagénico, es nocivo por ingestión, tóxico por inhalación e irritante para los [[ojo]]s, la [[piel]] y las vías respiratorias. Debe ser manipulado única y exclusivamente por personal capacitado y usando en todo momento equipos de protección personal (mandil manga larga, gafas, guantes, mascarilla, etc.). | ||
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| + | Aunque los efectos sanitarios de la exposición a este compuesto no han sido investigados en profundidad, se sospecha que puede ser cancerígeno y teratogénico. | ||
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| + | #Preparación: Disolver en un frasco de vidrio 4,2 g de NaNO2 en 20 ml de H3PO2 al 50% y enrazarlo con 300 ml de agua destilada. Verificar el [[pH]] el cual debe ser de 1,8. | ||
| + | #Procedimiento (Usar en todo momento equipos de protección personal: mandil manga larga, gafas, guantes de jebe grueso, mascarilla y botas de jebe): | ||
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| + | *Lavar cinco veces las superficies con paños humedecidos con solución de descontaminación preparada. Utilizar un paño diferente cada vez que se realice el lavado. | ||
| + | *Remojar por aproximadamente una hora cada uno de los paños utilizados durante el paso anterior, en un recipiente conteniendo solución de descontaminación. | ||
| + | *Neutralizar la solución de descontaminación con [[bicarbonato de sodio]], verificar que el pH esté entre 5 y 9. | ||
| + | *Verificar la presencia de bromuro de etidio en los paños y en las superficies utilizando una lámpara de luz ultravioleta. | ||
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| − | Bromuro de etidio: ¿agente mutágeno en el laboratorio?. Vol. 12 Núm.3. Julio-Septiembre 2019 Pags. 243-244 Rev Cuerpo Médico HNAAA 2019; 12(3). Disponible en [https://www.imbiomed.com.mx/articulo.php?id=114199 Bromuro de Etidio] | + | *''Bromuro de etidio: ¿agente mutágeno en el laboratorio?''. Vol. 12 Núm.3. Julio-Septiembre 2019 Pags. 243-244 Rev Cuerpo Médico HNAAA 2019; 12(3). Disponible en [https://www.imbiomed.com.mx/articulo.php?id=114199 Bromuro de Etidio] |
| − | + | *[https://www.sciencedirect.com/topics/neuroscience/ethidium-bromide Bromuro de Etidio] | |
| − | [[Category:Química]] | + | *[https://www.ibiantech.com/bromuro-de-etidio/ Descontaminación de Bromuro de Etidio] |
| + | [[Category:Química]][[Category:Biotecnología]][[Category:Biología molecular]] | ||
última versión al 14:35 2 sep 2025
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El bromuro de etidio (BrEt) es un colorante fluorescente que se usa en técnicas de biología molecular como la electroforesis en gel de agarosa de productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) hace muchos años, con medidas fluorimétricas sensibles debido al rango dinámico de fluorocromos disponibles, este químico emite una luz anaranjada cuando es expuesto a luz ultravioleta, que se intensifica después de haberse unido a una cadena de ADN. Conocido también con los siguientes nombres: Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-6-fenilfenantridinio, Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-9-fenilfenantridinio, Bromuro de 3,8-diamino-1-etil-6-fenilfenantridinio, Bromuro de Homidio, EtBr.
Sumario
Características
El bromuro de etidio es un colorante monomérico de fenantridina, que exhibe un aumento de fluorescencia de 20 a 25 veces al unirse al ADN bicatenario. El colorante se intercala entre pares de bases adyacentes en la molécula de ADN bicatenario. También se cree que el aumento de fluorescencia observado tras la excitación con luz ultravioleta del bromuro de etidio intercalado se debe en parte a la transferencia de energía de las bases del ADN al colorante.
La secuencia primaria del ADN tiene relativamente poco efecto en la unión de ácidos nucleicos, lo que hace de este colorante una buena tinción de uso general. El colorante penetra en geles electroforéticos de forma rápida y eficiente. El bromuro de etidio puede prefabricarse en geles, usarse como tinción posterior y también se usa ocasionalmente como prestina de ARN en la electroforesis en gel de formaldehído-agarosa.
Usos
Geles de agarosa
El gel de agarosa es una buena forma de separar el ADN según su tamaño, pero debe haber una forma de visualizarlo. Normalmente, se utiliza un colorante intercalante para este fin. Una elección muy común de colorante es el bromuro de etidio. El bromuro de etidio es una sal, por lo que se separará en solución para producir el ion etidio con carga positiva más un ion bromuro. El ion etidio planar puede insertarse (intercalarse) entre las bases apiladas del dsADN helicoidal, interactuando con ellas mediante fuerzas de Van der Waals. También se producen interacciones entre un catión etidio y los fosfatos con carga negativa del ADN.
Si bien el etidio presenta una fluorescencia naranja cuando se expone a la luz ultravioleta , lo hace con mucha más intensidad cuando se intercala con dsADN. Después de interactuar y concentrarse en el gel en las ubicaciones de las cadenas de ADN , el etidio se puede visualizar a través de la exposición del gel a la luz ultravioleta , generada a través de una caja de luz ultravioleta.
Descontaminación de Bromuro de Etidio
El bromuro de etidio (BrEt) es un agente intercalante usado comúnmente en los laboratorios de biología molecular para visualizar el ADN en geles de agarosa.
También es un potente mutagénico, es nocivo por ingestión, tóxico por inhalación e irritante para los ojos, la piel y las vías respiratorias. Debe ser manipulado única y exclusivamente por personal capacitado y usando en todo momento equipos de protección personal (mandil manga larga, gafas, guantes, mascarilla, etc.).
Aunque los efectos sanitarios de la exposición a este compuesto no han sido investigados en profundidad, se sospecha que puede ser cancerígeno y teratogénico.
Es por eso por lo que es muy importante descontaminar los instrumentos y equipos que se hayan usado con este compuesto. El método más conocido para la descontaminación utiliza una solución de Nitrito de sodio (NaNO2) y Ácido hipofosforoso (H3PO2).
- Preparación: Disolver en un frasco de vidrio 4,2 g de NaNO2 en 20 ml de H3PO2 al 50% y enrazarlo con 300 ml de agua destilada. Verificar el pH el cual debe ser de 1,8.
- Procedimiento (Usar en todo momento equipos de protección personal: mandil manga larga, gafas, guantes de jebe grueso, mascarilla y botas de jebe):
- Lavar cinco veces las superficies con paños humedecidos con solución de descontaminación preparada. Utilizar un paño diferente cada vez que se realice el lavado.
- Remojar por aproximadamente una hora cada uno de los paños utilizados durante el paso anterior, en un recipiente conteniendo solución de descontaminación.
- Neutralizar la solución de descontaminación con bicarbonato de sodio, verificar que el pH esté entre 5 y 9.
- Verificar la presencia de bromuro de etidio en los paños y en las superficies utilizando una lámpara de luz ultravioleta.
Fuentes
- Bromuro de etidio: ¿agente mutágeno en el laboratorio?. Vol. 12 Núm.3. Julio-Septiembre 2019 Pags. 243-244 Rev Cuerpo Médico HNAAA 2019; 12(3). Disponible en Bromuro de Etidio
- Bromuro de Etidio
- Descontaminación de Bromuro de Etidio
