Anexo:Colorantes naturales

Colorantes naturales Concepto: Son aquellos que se extraen directamente de los animales y las plantas.

Anexo:Colorantes naturales. Se extraen directamente de los animales y las plantas.

Características físicas

Por sus características físicas se pueden agrupar en cuatro grupos:

1. Colorantes directos: Son los grupos de colorantes de antocianina, carotinoide derivados de calcona. Los colorantes son obtenidos de una solución acuosa y esta extracción se usa directamente para teñir o pintar en frió o en caliente. A veces se usa sustancias auxiliares como ácidos o sales. Ejemplo: la flor de cártamo, cúrcuma, azafrán, cempoalxóchitl, etc.
2. Mordentados: Este tipo de colorantes no tienen por si mismo el poder de entintar, solo con un tratamiento especial de sales metálicas solubles que reaccionan sobre la fibra. Esta técnica se aplica a la mayoría de las plantas que dan color como la gardenia, cempoalxóchitl, rubia, cochinilla, palo de Campeche y de Brasil, etc.
3. Tipo de reducción: Derivados del Indol, estas materias colorantes se encuentran en el interior de los cuerpos vegetales o animales, pero son insolubles, para darles solubilidad, se les aplica una sustancia reductora, obteniéndose una solución incolora que se aplica a la fibra y después, mediante una oxidación aparece el color, como ejemplo esta el añil.
4. Pigmentos: Polvos de materiales minerales, son insolubles que no tienen poder de entintar, por lo cual solo pueden utilizarse mezclándose con otro cuerpo, como el engrudo, cola, resina, caseína, clara de huevo, etc., con los que se forma una pasta para pintar.

Más importantes

Hematoxilina

Se extrae del palo de Campeche, planta leguminosa arborescente que procede de América Central. Es el colorante nuclear más usado en histología. Se presenta en forma de cristales incoloros o ligeramente amarillentos, solubles en agua, alcohol y glicerina.

La hematoxilina por sí misma no es una sustancia colorante, pero por oxidación da lugar a la hemateína, que sí ofrece propiedades tintoriales. El proceso por el cual se transforma la hematoxilina en hemateína y que constituye el proceso de maduración es variable, y se acelera por la adición de sustancias oxidantes, tales como el agua oxigenada, el permanganato de potasio, el yodato potásico o el óxido de mercurio rojo, que actúan en presencia del aire.

Puede adquirirse en el comercio la hemateína pura. Pero la hemateína tampoco colora el tejido si no se le une con una base, como el alumbre u otra, que actúa de mordiente, y con la que forma una sal denominada laca. El mordiente puede unirse a la hematoxilina o puede aplicarse al tejido antes de la coloración.

Muchas son las fórmulas empleadas en la preparación de la hematoxilina; las más importantes son las siguientes:

Hematoxitina acida de Ehrlich

Fórmula:

0,5 g de alumbre potásico

25 ce de agua destilada

25 ce de glicerina

0,5 g de hematoxilina

25 ce de alcohol etílico absoluto

2,5 ce de ácido acético glacial.

Preparación': Se disuelve el alumbre en el agua destilada; luego se le agrega la glicerina. Por otra parte se disuelve la hematoxilina en el alcohol; se mezclan ambas soluciones, para luego poner el ácido acético.

El tiempo de maduración es de dos semanas. Puede abreviarse sustituyendo la hematoxilina por hemateína, en cuyo caso se ponen 0,125 g de este producto, en lugar de los 0,5 g de hematoxilina. El tiempo de coloración es de unos 5'. La solución colorante se conserva durante varios años.

Hematoxilina de Harris

Fórmula:

1g de hematoxilina

20g de alumbre potásico

10ce de alcohol etílico absoluto

0,5g de óxido de mercurio rojo

200ce de agua destilada.

Preparación: Se disuelve la hematoxilina en el alcohol con ayuda del calor, y el alumbre en el agua destilada. Se unen ambas soluciones al siguiente día y se agrega luego el óxido de mercurio rojo. Se hierve durante unos minutos, se filtra después de enfriar, y se lleva la solución al volumen original con alcohol etílico al 50%. No necesita período de maduración, por lo que puede usarse inmediatamente. Dura varios años su poder de tinción, y la coloración se obtiene en unos 5'.

Hematoxilina de Hansen

Es similar a la anterior, pero se sustituye el óxido de mercurio rojo por 3 cc de un solución acuosa de permanganato de potasio.

Hematoxilina de Unna

Se prepara en la misma forma que la de Harris y la de Hansen, pero se pone 0,2 cc de agua oxigenada, en lugar del óxido de mercurio rojo o del permanganato potásico, para acelerar la oxidación.

Hematoxilina de Delafield

Fórmula:

1 g de hematoxilina.

6,25 cc de alcohol etílico absoluto.

100 cc de agua destilada.

10 g de alumbre amoniacal.

25 cc de glicerina pura.

25 cc de alcohol metílico.

Se le añade agua destilada a partes iguales antes de usarla.

Preparación: Se disuelve la hematoxilina en el alcohol, y el alumbre en el agua destilada caliente. Se mezclan ambas soluciones y se dejan al aire y a la luz, durante 3-5 días; para esto se ponen en un beaker abierto. Luego se filtra y se añaden la glicerina y el alcohol metílico. Se deja otros 3-5 días en reposo y se filtra nuevamente.

No necesita tiempo de maduración, y conserva sus propiedades tintoriales durante mucho tiempo. El tiempo de coloración es de unos 15' aproximadamente.

Hematoxilina fosfotúngstica de Mallory

Fórmula:

80 cc de agua destilada

0,1 g de hematoxilina

20 cc de solución de ácido fosfotúngstico al 10%

0,2 cc de agua oxigenada.

Preparación: Se disuelve la hematoxilina en el agua destilada, con ayuda del calor. Se añade la solución de ácido fosfotúngstico, cuando enfríe, y luego se agrega el agua oxigenada.

Este colorante ha sido usado para el tejido muscular; se utiliza como fijador el líquido de Zenker, que como tiene bicromato potásico, le comunica color rosa al tejido conectivo, en tanto que las fibras musculares quedan teñidas de azul. Puede rebajarse la coloración y pasar el tejido brevemente por una solución de bicromato potásico al 5%.

Hematoxilina férrica de Weigert Fórmula:

1 g de hematoxilina

100 cc de alcohol etílico absoluto

4 cc de percloruro de hierro oficinal

1 cc de ácido clorhídrico

95 cc de agua destilada.

Preparación: Se disuelve la hematoxilina en el alcohol. El percloruro de hierro con el ácido clorhídrico se disuelven, a su vez, en el agua destilada. Se mezclan ambas soluciones, a partes iguales, al momento de usarse.

El tiempo de coloración es de 5'. No necesita diferenciación, pues tiñe solamente los núcleos. Para colorar el citoplasma puede ponerse el material en una solución acuosa concentrada de ácido pícrico y fucsina acida, durante 1', después de lo cual se lava en agua abundante.

La fórmula de la solución de ácido pícrico es la siguiente:

100 cc de ácido pícrico en solución acuosa concentrada

10 cc de solución acuosa de fucsina ácida al 1%.

Hematoxilina férrica de Heidenhain

Fórmula:

1 g de hematoxilina

10 cc de alcohol absoluto

90 cc de agua destilada.

Preparación: Se disuelve la hematoxilina en el alcohol y luego se añade el agua destilada. Se deja madurar un mes y antes de usarla se le diluye a partes iguales, en agua destilada.

La coloración se hace en 1-36 horas, y los cortes toman color negro-pardo. El tejido conjuntivo puede teñirse de rojo con picrofucsina, después del lavado correspondiente. Puede emplearse también el verde luz o el orange G, como colorantes de contraste. La diferenciación se realiza con alumbre de hierro al 1-5%. Antes de poner el corte en el colorante debe tenerse en el alumbre de hierro, que actúa como mordiente. El calor acelera la coloración.

Hemalún ácido de Mayer, hemalumbre o laca alumínica de Mayer

Fórmula:

1 g de hematoxilina cristalizada

1 000 cc de agua destilada

0,2 g de yodato sódico

50 g de alumbre potásico

50 g de hidrato de cloral

1 g de ácido cítrico.

Preparación: Se disuelve la hematoxilina, el yodato sódico y el alumbre potásico en el agua destilada, a la temperatura ordinaria. Se deja en reposo la solución durante 24 horas y entonces se añade el hidrato de cloral y el ácido cítrico. Agítese bien y fíltrese. El tiempo de coloración es de 5-15'.

Si no hay sobrecoloración, la cromatina toma color rojizo. Este color se vira al azul, si se somete el tejido a la acción de una solución alcalina, por ejemplo: una solución de bicarbonato sódico. Si hay sobrecoloración se corrige con una solución de alcohol clorhídrico al 0,5%, o con una solución de ácido acético al 1%. Si la coloración es difusa, se someten las piezas a un lavado en una solución de alumbre al 1% y luego en agua.

Laca alumínica de Carazzi
Fórmula:

1 g de hematoxilina

100 ce de agua destilada

200 ce de glicerina

50 g de alumbre potásico

0,2 g de yodato potásico.

Esta fórmula puede usarse inmediatamente y se aplica de modo similar al hemalún ácido de Mayer; da magníficos resultados.

Carmín

Es un colorante que se extrae de un insecto hemíptero, de la familia Coccidae, el Coccus cacti, conocido vulgarmente con el nombre de cochinilla, el cual es originario de México; se halla especialmente en la región de Oaxaca, pero puede aparecer también en el sureste de Estados Unidos, y ha sido aclimatado y cultivado, además, en España (Andalucía y Valencia).

La Coccicultura se ha practicado asimismo en la India y en Honduras. Fue descubierto el insecto por Hernán Cortés, pero ya los indígenas lo cultivaban por sus propiedades tintoriales. La hembra es la portadora de la sustancia colorante, y se utiliza el animal completo.

El carmín natural hoy está siendo remplazado por el carmín sintético. Es un excelente colorante nuclear, aunque actualmente no se emplea tanto, a causa de la dificultad con que colora las secciones de sustancias previamente incluidas y por ser perjudiciales a su acción colorante algunos fijadores muy usados, tales como el formol y el ácido ósmico.

Son recomendados los fijadores a base de bicloruro de mercurio y los que contienen bicromato potásico. No es soluble en agua o alcohol, pero sí en álcalis, como el hidróxido de amonio y el bórax. El carmín puede combinarse con la eosina y el ácido pícrico, como colorantes de fondo.

Bórax-carmín de Grenacher

Fórmula:

2-3 g de carmín

4 g de bórax

100 cc de agua destilada

100 cc de alcohol etílico de 70°

Preparación: Se mezcla el carmín con el bórax en una cápsula de porcelana; añádase el agua destilada caliente a 100°. Se deja enfriar y más tarde se agrega el alcohol. Debe dejarse madurar de 24 horas a una semana antes de usarse, y debe agitarse frecuentemente. Luego se filtra y conserva en un frasco de color ámbar, bien cerrado.

El tiempo de coloración es de uno a varios días. Las piezas se diferencian con alcohol clorhídrico al 0,5%, y el lavado se hace con alcohol de 70°. El tiempo de coloración se acelera con el calor.

Carmín dumínico de Grenacher

Fórmula:

1 g de carmín

3-4 g de alumbre potásico o amoniacal

100 ce de agua destilada

1 ce de formol.

Preparación: Se disuelve el carmín y el alumbre en el agua destilada. Se hierve la solución durante 15', luego se enfría, se filtra, y se le añade el formol. El tiempo de tinción es de 1-24 horas, sin presentar sobrecoloración. El lavado se hace en agua hasta que no desprenda colorante.

Carmín Utico de Orth

Fórmula:

3-5 g de carmín

1 g de carbonato de litio

100 cc de agua destilada.

Preparación: Se prepara una solución de carbonato de litio saturada, en frío (aproximadamente al 1 %); luego se disuelve el carmín, con ayuda del calor, hasta la ebullición. Se deja enfriar y se filtra. El tiempo de coloración es de 2-5'. La diferenciación se realiza con alcohol clorhídrico al 1%, y el lavado, con agua.

Carmín láctico

Fórmula:

0,3 g de carmín

100 cc de ácido láctico

El tiempo de coloración es de 30-60', según el tamaño del ejemplar; se controla el resultado con el microscopio. Se emplea especialmente para teñir céstodos.

Acetocarmín

Fórmula:

1 g de carmín

100 cc de agua destilada

85 cc de ácido acético glacial.

Preparación: Se mezcla el ácido acético con el agua y se le da calor hasta la ebullición, más tarde se retira de la llama y se le añade rápidamente el carmín. Se enfría en caja de hielo o agua corriente y se filtra. Debe conservarse en refrigeración.

Este colorante tiene muchas aplicaciones prácticas en el estudio de cromosomas en glándulas salivales de Drosophila; de las células del meristemo radicular de algunas plantas, etcétera.

Clorocarmín de Hollande

Fórmula:

14 g de carmín

5 cc de ácido clorhídrico puro

25 cc de agua destilada.

Preparación: Se pone el ácido clorhídrico en una cápsula de porcelana grande y se le agrega lentamente el carmín pulverizado. Se agita constantemente hasta formar una masa homogénea y compacta. Se deja en reposo durante 24 horas, y luego se agrega el agua destilada. Hiérvase por 30' y fíltrese. Complete el volumen de 180 ce con alcohol de 70°.

El tiempo de coloración es de 2-24 horas. El lavado es con alcohol de 75° y luego con agua destilada. Diferenciar con alumbre de hierro al 3%. Con el diferenciador los cortes se tornan negros al principio y luego sobreviene la decoloración lentamente. En el momento oportuno se lavan con agua destilada. El colorante es neutro y tiñe de negro o en tonos que varían desde este hasta el rojo, cuando se emplea el alumbre.

Orceína

Es un colorante de origen vegetal, que se extrae de la acedera. Se le utiliza para el estudio de cromosomas por la técnica del aplastado.

Acetorceína

Fórmula:

2,2 g de orceína sintética

100 cc de ácido acético glacial.

Preparación: Se hierve lentamente la solución y se agita constantemente por unos minutos. Luego se deja enfriar y se filtra. Se usa en el estudio de la mitosis en raíz de cebolla, etcétera.

Acetorceína de La Cour

Fórmula:

20-50 cc de agua destilada

70-30 cc de ácido acético glacial

1 g de orceína.

Para los vegetales se recomienda al ácido acético al 50%; para la Drosophila es preferible el ácido acético al 70%.

Azafrán

Ha sido usado como colorante para sustancias colágenas.

Pimentón

Se ha empleado para colorar grasas; se separa el pigmento que contiene mediante el alcohol etílico. El extracto alcohólico ofrece un aspecto rojizo transparente y se aplica directamente.

Fuentes

• De la Torre y Callejas, Salvador Luis. Manual básico de microtecnia biológica. Edición Revolucionaria. Instituto Cubano del Libro. La Habana, 1975. pp. 130-140.
• Colorantes naturales.
• Clasificación de los colorantes neutrales