Anexo:Clases de reactivos fijadores

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Clases de reactivos fijadores
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Concepto:Los reactivos fijadores son aquellos reactivos que coagulan las materias albuminoideas de los tejidos, haciendo inalterable la forma y estructura de las células. Pueden ser físicos o químicos.

Anexo:Clases de reactivos fijadores. Los reactivos fijadores pueden ser físicos o químicos.

Contenido

Fijadores físicos

Calor

La fijación mediante el calor se hace principalmente en bacteriología. Así quedan fijados los microorganismos al portaobjeto y no se desprenden con los sucesivos lavados. El frío, en cambio, es un pésimo fijador; pero para las piezas previamente fijadas es un magnífico indurante.

Los tejidos pueden fijarse con el calor colocándolos dentro de un tubo de ensayo con formol al 10% u otro fijador y sometiéndolos a la temperatura de ebullición. En pocos minutos se coagula la albúmina. Este método es poco usado en histología por las alteraciones que produce a los tejidos.

Desecación

Es más usada que el calor, sobre todo para estudiar las células halladas en líquidos como la sangre o la linfa, que se extienden en fina capa en el portaobjeto, y se dejan secar al aire libre y a la temperatura ordinaria. Se usa también para protozoarios.

Fijadores químicos

Simples

Ácido acético

Se usa el 1% como fijador nuclear, pero no conserva bien el citoplasma. Fija en 1-2 horas. En unión de otro fijador viabiliza la difusión.

Ácido nítrico

Actúa en solución acuosa al 2% y al 5% en seis horas. No debe prolongarse el tiempo de fijación porque altera los tejidos. Conserva las estructuras nucleares. No debe lavarse en agua después de fijado con ácido nítrico porque hincha el tejido conjuntivo; por eso debe trasladarse la pieza directamente al alcohol al 70% durante 24 horas.

Ácido pícrico

Es poco soluble en agua. Más soluble en alcohol. Se usa en soluciones acuosas al 1%. Las soluciones, de color amarillo, no deben calentarse a fuego vivo por sus propiedades explosivas. El tiempo de fijación es de 1-24 horas, según el tamaño de la pieza. Después de fijarse se pasan directamente al alcohol de 70 grados. El lavado en agua no es recomendable porque el tejido conjuntivo se hincha demasiado.

Se usa preferentemente para fijar cartílagos, huesos embrionarios, epitelios y glándulas; también para los testes de lepidópteros para estudios de cromosomas, etcétera. Las manchas de la piel y paños de hilo pueden quitarse con una solución de carbonato de litio. Las manchas de los tejidos de lana y seda son indelebles.

Ácido crómico

Se emplea en solución acuosa al 1.3-1.2%. Tiempo de fijación de 6-12 horas para piezas pequeñas, y de 10-15 días para las grandes. Debe de usarse abundante líquido fijador. Pude lavarse en agua durante 24 horas.

Es poco usado por fijar mal el citoplasma y hacer difícil la coloración ulterior; no obstante, en combinación con otros fijadores da buenos resultados. Debe manipularse en la oscuridad pues precipita a la luz. Es muy delicuescente, por lo que debe colocarse en frascos herméticamente cerrados y con tapón esmerilado o parafinado.

Ácido ósmico

Es una sustancia muy volátil a la temperatura ordinaria y sus vapores son muy irritantes para la mucosa respiratoria, razón por la cual debe trabajarse bajo una campana de vidrio y con las manos enguantadas. Es buen fijador y su acción es inmediata, aunque no penetra profundamente, por eso se usan piezas de no más de 1-2 mm3. Las grasas se ennegrecen por este ácido y no deben aclararse con xilol, trementina, o éter, porque los disuelve, debe usarse cloroformo o aceite de clavos.

Se emplea al 1-2% por 12-24 horas en un frasco herméticamente cerrado y al abrigo de la luz. Se lava con agua por 24 horas. Para conservar el ennegrecimiento producido por la solución de ácido ósmico se lleva al alcohol de 70 grados; después del lavado en agua, se le adiciona un poco de sulfuro sódico, el cual estabiliza y pronuncia aún más el ennegrecimiento.

El ácido ósmico se conoce también por tetróxido de osmio, nombre que parece más correcto, ya que este cuerpo realmente no presenta las propiedades de los ácidos. Se usa además para fijación de protozoarios. En este caso se introduce el ácido ósmico en un frasco herméticamente cerrado y luego cautelosamente se destapa y se apoya en la boca del frasco abierto, durante medio minuto, la preparación situada en el portaobjeto, cuidando de los vapores que son altamente nocivos y que provocan graves conjuntivitis. Su acción nociva no se percibe hasta después de causada la lesión.

Alcohol etílico

El alcohol etílico anhidro o absoluto se usa para la fijación, y sirve además como indurante y deshidratador. Su acción es rápida. Las piezas de 2-3 milímetros se fijan en 2-3 horas. Se recomienda cambiar el alcohol cada 3-4 horas cuando las piezas son mayores y requieren más tiempo para la fijación.

No es recomendable prolongar el tiempo de fijación para evitar la contracción del tejido. Si la pieza ha de permanecer más tiempo en el alcohol, es preferible pasarla a alcoholes de más baja graduación (80 o 90 grados); pero antes de colorar e incluir en parafina, debe de llevarse nuevamente al alcohol absoluto.

Alcohol metílico

Es poco usado, si se exceptúa se emplea para la fijación del tejido sanguíneo.

Acetona anhidra

No es un buen fijador, pero se usa para diagnósticos rápidos. Se emplea como deshidratante e indurante, sobre todo en los métodos de inclusión rápida. Altera la coloración nuclear y retrae demasiado los tejidos. Las piezas de 1-3 milímetros se fijan en 1-3 horas. No debe de usarse agua ni alcohol después de la fijación con acetona. Algunos la recomiendan como reactivo intermediario para incluir la pieza en parafina.

Formol o formalina

Es una solución acuosa del formaldehído gaseoso al 40%. Es el líquido más usado en microtecnia y se le considera como el fijador universal. Se emplea al 10% y el tiempo de fijación es de 24-48 horas. Debe lavarse rápidamente en agua y luego pasar la pieza a los alcoholes.

Es excelente para fijar el sistema nervioso y conservar las apetencias colorantes durante muchos años. El formol puro es un mal fijador, por lo que se usan las soluciones acuosas.

El formol comercial contiene algo de ácido fórmico y por eso no puede tratarse por determinados métodos argénticos necesarios para preparar el tejido nervioso. El formol se neutraliza poniendo en el fondo del frasco una pequeña cantidad de carbonato cálcico, creta, mármol o un poco de carbonato de magnesio; debe de agitarse varias veces, y con papel de tornasol azul se examina más tarde.

Bicloruro de mercurio

Se usa en la proporción de 6.5-7 gramos en 100 cc de agua destilada caliente. Se colocará la pieza al enfriar la solución, y la fijación se logra en unos minutos si la pieza es pequeña. No debe lavarse en agua, sino pasarla directamente al alcohol de 90 grados.

Presenta la inconveniente de que el bicloruro de mercurio precipita en el seno de los tejidos y entonces hay que agregar al alcohol unas gotas de disolución de Lugol. Luego se añade al tejido una solución de hiposulfito de sodio al 0.25%, durante unos minutos, para eliminar el yodo del Lugol, el cual altera las apetencias colorantes de la célula.

Fórmula de la solución de Lugol:

  • 2g de yodo
  • 3g de yoduro potásico
  • 100 cc de alcohol de 90 grados.

Bicromato potásico

Se usa poco por ser defectuosa la fijación de la estructura nuclear. Generalmente se emplea asociado a otros reactivos. Algunos lo utilizan de soluciones acuosa al 3%. La pieza debe llevarse directamente al alcohol.

Cloruro de zinc

Es un cuerpo sumamente delicuescente. Se usa como fijador en solución acuosa al 2% durante ocho días. Las piezas conservan las propiedades colorantes, especialmente las anilinas.

Compuestos

Los fijadores químicos compuestos están constituidos por la unión de varios de los fijadores químicos simples. Éstos, se conocen por el nombre de su autor, entre los principales se encuentran:

Líquido de Fremming

Estas sustancias se mezclarán inmediatamente antes de usarse. Es un buen fijador nuclear, especialmente para las figuras mitósicas. Tiempo de fijación: 24-48 horas. Lavado de agua durante 24 horas. Se presenta para colorar con violetas de genciana o con hematoxiliana férrica.

Fórmula:

  • 15 partes de ácido crómico al 1%
  • 4 partes de ácido ósmico al 2%
  • 1 parte de ácido acético glacial

Líquido de Carnoy

Es un excelente fijador nuclear, especialmente para las figuras mitósicas. Las piezas pequeñas son fijadas a la hora. Las de tres milímetros son fijadas en 2-3 horas. No debe de prolongarse el tiempo de fijación. Debe llevarse directamente a los alcoholes.

Fórmula:

  • 6 partes de alcohol absoluto
  • 3 partes de cloroformo
  • 1 parte de ácido acético glacial

Líquido de Bouin

Es de uso corriente y reporta grandes ventajas para la fijación de embriones y cartílagos. La coloración de los tejidos fijados con este líquido se conserva muy bien y puede usarse con casi todos los colorantes. Además, es ligeramente descalcificarte. Debe pasarse directamente al alcohol de 70 grados. Tiempo de fijación: 1-24 horas, según el tamaño de la pieza, las cuales no debe ser mayores de 5-6 milímetros de espesor.

Fórmula:

  • 15 partes de solución saturada de ácido pítrico
  • 5 partes de formol
  • 1 parte de ácido acético glacial

Líquido de Zenker

Es un excelente fijador para las estructuras celulares. Permite la tinción por algunos métodos de coloración. Tiempo de fijación: 1-24 horas, según el tamaño de la pieza. Lavado en agua durante 24 horas.

Presenta el inconveniente de que el bicloruro de mercurio que contiene, forma precipitados en los tejidos, que hay que eliminar adicionándole el alcohol usado al deshidratar, unas gotas de Lugol o de tinta alcohólica de yodo (10 g de yodo en 100 cc de alcohol absoluto). Luego se le añade hiposulfito de sodio al 0.25%, para eliminar el yodo.

Se recomienda colorar inmediatamente después de fijado, pues pasado el año aunque esté incluido en parafina pierde sus propiedades tintóreas.

Fórmula:

  • 5 g de bicloruro de mercurio
  • 2.5 g de bicromato potásico
  • 1 g de sufato sódico
  • 100 cc de agua destilada

En el momento de usarse debe añadirse 5 cc de ácido cético glacial.

Fijador de Lom

Hay que poner Lugol y luego hiposulfito de sodio en la forma indicada con anterioridad para fijadores que contienen bicloruro de mercurio.

Fórmula:

  • 10 partes de bicloruro de mercurio
  • 2 partes de ácido acético glacial
  • 2 partes de formol al 40 %
  • 5 partes de alcohol butílico

Líquido de Navashin, modificado por Randolph’s

Este fijador consta de dos soluciones. Se mezclan ambas soluciones a la hora de usarse. La fijación se hace en 1-24 horas y el lavado debe ser en alcohol de 70 grados.

  • Solución A
92 cc de agua destilada
7 cc de ácido acético glacial
1g de ácido crómico
  • Solución B
30 cc de formol neutro
70 cc de agua destilada

Fijador de Allen

Se emplea en estudios de cromosomas en testes de lepidópteros. Se fija en 24 horas y el lavado se hace en alcohol.

Fórmula:

  • 75 cc de ácido pícrico
  • 15 cc de formol
  • 10 cc de ácido acético glacial
  • 1 g de urea

Solución de alcohol-formol-acético

Se fija en 24 horas y el lavado debe de hacerse en alcohol de 70 grados.

Fórmula:

  • 10 partes de formol al 40%
  • 50 partes de alcohol etílico absoluto
  • 40 partes de agua destilada
  • 2 partes de ácido acético glacial

Solución alcohol-acética

Debe de preparase en el momento de usarse. La fijación se hace en 15’ a una temperatura de 60 grados.

Fórmula:

  • 3 partes de alcohol etílico absoluto
  • 1 parte de ácido acético glacial

Fijador de Regaud

Es el más empleado para la demostración de mitocondrios. El tiempo de fijación es de cuatro días y se remueve diariamente. Luego se traslada por una semana a una solución de bicromato potásico al 3%. El lavado es en agua durante 24 horas. La coloración puede hacerse con hermatoxilina férrica.

Fórmula:

  • 20 partes de formol
  • 5 partes de ácido acético glacial.

A los cuatro días se le pone 80 partes de bicromato potásico al 3% y dejarlo en e’l siete días.

Solución formol-bromuro de Cajal

Se emplea para la demostración de las estructuras neuróglicas (sistema nervioso). Tiempo de fijación: 2-3 días. Los cortes se hacen por congelación a 15 micrones.

Fórmula:

  • 15 cc de formol neutro
  • 2 g de bromuro de amonio
  • 85 cc de agua destilada

Solución de formol-urano de Cajal

Está recomendado para estudios del aparato de Golgi, de la neuroglia y los mitocondrios. El tiempo de fijación es de 12-48 horas, según el tamaño de la pieza y las estructuras que se desean estudiar. Para el aparato de Golgi basta 12 horas, para los mitocondrios, seis, y para las neuroglias, 24-48 horas. Se aconseja que la pieza no exceda de 3-4 milímetros.

Fórmula:

  • 1 g de nitrato de uranio
  • 15 cc de formol neutro
  • 85 cc de agua destilada

Fuente

  • De la Torre y Callejas, Salvador Luis. Manual básico de microtecnia biológica. Edición Revolucionaria. Instituto Cubano del Libro. La Habana, 1975. pp.96-105.